盐酸美拉舒敏活性药物中无机砷的测定

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盐酸美拉舒敏活性药物中无机砷的测定

Determination of Inorganic Arsenic in Melarsomine Dihydrochloride Active Pharmaceutical Ingredient

( By: Warren T. Corns, Cornelius Brombach and Bin Chen, PSA / UK)

 ( Pittcon Presentation Posters)

Introduction

  盐酸美拉沙明（C13H21asn8s2·2HCl）是一种治疗犬心蠕虫（Dirofilaria immitis）的有效药物成分。该化合物是一种分子量为501.34g的水溶性有机砷化学治疗剂，化学上称为二（2-氨基乙基）、二氢氯化物的4-[（4，6-二氨基-1，3，5-三唑-2-基）氨基]苯基二硫代亚砷酸盐。相对于分子量，活性原料药含有大约14%的砷。

  根据API中砷（III）和砷（V）的总和，无机砷的规格限值为50 ppm（mg/kg）。本文讨论了用液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法（LC-HG-AFS）测定无机砷的新方法的开发。本文所示的工作是一项初步研究，旨在按照VICH GL2“分析程序方法验证”指南进行更详细的方法验证。

  开发这种方法的主要分析挑战之一是对含14%质量砷的活性原料药化合物中的无机砷进行浓度极限测试。无机砷极限值为50 ppm，基本上比活性原料药中的砷质量少2800。

Sample Preparation and Instrumentation

   将50mg活性原料药溶于50ml琥珀A级容量瓶中，用去离子水溶解，制备出1000ppm活性原料药储备溶液。使用10到30倍的去离子水进一步稀释，因此等于10000到30000的重量稀释系数。样品中还加入了As III和As V 物种(species )，以检查峰值恢复率、潜在基质效应和确定保留时间。一旦制备好，所有溶液都储存在黑暗中，并在4℃冷藏，以防止API降解和亚砷酸盐氧化成亚砷酸盐。

   用磷酸钠缓冲液在pH6.2的条件下，用强阴离子交换柱（PSA C1）分离盐酸美拉舒明中的无机砷（亚砷酸盐和亚砷酸盐）。在对无机砷类进行洗脱后，使用专用冲洗溶液（见表1）从色谱柱中冲洗二氢甲藻红素。

   图2显示了PSA仪器的照片，该仪器包括20.400自动取样器、10.820-2000二元梯度泵洗脱模块化界面单元和10.055 Millennium Excalibur Hydrode Generation-AFS。在6通阀处使用50μl注入回路，以尽量减少加载到色谱柱上的样品量。显示仪器配置的示意图如图3所示。当砷从SAX柱上洗脱时，使用10%的HCl在线酸化，然后使用0.7%的硼氢化钠还原为砷。这些物质在气液分离器中分离，然后通过PermapureTM干燥管输送到原子荧光光谱仪。气态氢化砷在氢火焰中被雾化，并用一个增强放电空心阴极灯激发。然后用一个短带通滤波器测量波长隔离后的原子荧光信号。整个系统由PSA SAMS+软件4控制。对于CFR 21合规性，可以使用其他第三方软件包。  

Results and Discussion

   图4所示为10000倍稀释的三聚氰胺活性原料药样品的典型色谱图。正如所预期的，无机砷的主要形式是亚砷酸盐，这被发现是低于API无机砷极限值50ppm。褪黑素活性原料药化合物洗脱约15.8分钟，并与无机砷物种(species)很好地分离。氢化物发生的一个优点是，Melarsomine API化合物具有较低的氢化物发生率，从而最大限度地减少高质量砷的携带量。相反，如果测量是在不产生氢化物的情况下进行的，那么探测器污染将是真正的问题。该应用程序的主要挑战是开发合适的流动相，以完全冲洗SAX柱中的三聚氰胺。如果达不到这一点，那么美乐沙明保留强烈，并最终发生过度的柱出血，导致检测器基线升高，无法检测到无机砷物种。图5显示了砷极限值下加标样品的典型色谱图。用10000倍的稀释液，在工作溶液中等于5ppb。表2提供了稀释量在10000至30000倍之间的活性原料药的一些初步数据，并在稀释限值处出现峰值。AsIII 的峰值回收率在97%到108%之间，AsV的峰值回收率在74%到92%之间。重复运行的精度通常小于5%。

Conclusions

   建立了测定盐酸美拉舒敏活性原料药中无机砷的新方法。LC-HG-AFS为砷（III）和砷（V）提供了一种低成本、灵敏的分析方案，仪器检测限分别小于0.1ppb和0.3ppb。对于10000稀释，这相当于活性原料药中1.0和3.0 ppm的MDL，远远低于无机砷的要求限值。开发了一种专用冲洗液，用于从色谱柱中洗脱活性原料药。

(API：活性药物成分)

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